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This content has not yet been translated. What you're seeing is the content in the original language.Le competenze dell'Istituto di Neuroscienze sono ripartite nelle varie sedi in funzione delle tecnologie correntemente utilizzate.
Le competenze di Farmacologia Cellulare e Molecolare della sede di Milano dell'Istituto di Neuroscienze riguardano un vasto assortimento di tecniche tra cui:
Tecniche morfologiche
- microscopia elettronica a trasmissione e scansione
- criosezioni
- tecniche di processamento d'immagini
- tecniche immunoistochimiche ed immunocitochimiche
(immunofluorescenza, immuno-perossidasi ed immunomicroscopia elettronica)
- microscopia ottica e confocale, tecniche di videoimaging
Tecniche di biologia cellulare
- analisi fluorimetriche di[Ca2+] in popolazioni cellulari
- determinazioni di [Ca2+] in singola cellula mediante videomicroscopia computerizzata
- tecniche di coltura di cellule e tessuti (ad es. colture primarie di neuroni ippocampali e di epatociti embrionali, immortalizzazione di sottotipi cellulari altamente specializzati)
- analisi di trasduzione del segnale
- frazionamento subcellulare
Tecniche biochimiche e farmacologiche
- tecniche elettroforetiche: 1D e 2D SDS-PAGE
- cross-linking e marcatura idrofobica di proteine
- saggi enzimatici
- tecniche di fosforilazione proteica
- preparazione, purificazione e caratterizzazione di proteine
- saggi di affinità con radioligandi per recettori e canali ionici
- elettroforesi e cromatografia su strato sottile per l'analisi di aminoacidi e peptidi
- assunzione, deposito e rilascio di ammine marcate
- trasferimento di proteine su supporto rigido (Western blotting)
Tecniche immunologiche
- saggi ELISA per anticorpi
- preparazione, purificazione e caratterizzazione di anticorpi monoclonali e policlonali
- immunopurificazione di proteine
Tecniche di biologia molecolare
- costruzione di virus vaccinici ricombinanti per ricombinazione omologa
- ibridazione "in situ"
- saggi di "run off" nucleare
- DNase footprinting e saggi EMSA
- PCR, RT-PCR, PCR a visualizzazione differenziale
- analisi di attività di promotori (usando luciferasi o CAT come enzimi reporter)
- tecniche standard di DNA ricombinante
- saggi di protezione dalla RNasi
- transfezioni stabili e/o transienti di cellule eucariote
Tecniche elettrofisiologiche
- patch-clamp su cellula intera in colture cellulari o sezioni cerebrali
Le competenze della sede di Neurofisiologia di Pisa dell'Istituto di Neuroscienze riguardano un vasto assortimento di tecniche tra cui:
Tecniche morfologiche
- microscopia elettronica a trasmissione
- analisi di sezioni seriali
- tecniche di processamento d'immagini
- tecniche immunoistochimiche ed immunocitochimiche
(immunofluorescenza, immuno-perossidasi ed immunomicroscopia elettronica)
- microscopia ottica e confocale, tecniche di videoimaging a livello cellulare
Tecniche di biologia cellulare
- determinazioni di [Ca2+] in singola cellula tramite microscopia confocale e videomicroscopia time-lapse
- tecniche di coltura di cellule e tessuti (ad es. colture primarie di neuroni corticali e di cellule retiniche. Coltura di linee cellulari immortalizzate)
- analisi di trasduzione del segnale
- transfezione e marcatura di cellule isolate con gene-gun ad elio
Tecniche biochimiche e farmacologiche
- elettroforesi di DNA e proteine
- cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC)
- analisi di neurotrasmettitori
Tecniche immunologiche
- Western blotting
- saggi ELISA
Tecniche di biologia molecolare
- PCR, RT-PCR, PCR a visualizzazione differenziale
- saggi di protezione dalla RNasi
- ibridazione "in situ"
Tecniche elettrofisiologiche
- patch-clamp su cellula intera in colture cellulari o sezioni cerebrali
- registrazioni elettrofisiologiche da singole unità della corteccia visiva
- registrazioni di elettroretinogrammi e potenziali visivi evocati nei roditori
- registrazioni di potenziali di campo
Comportamento animale
- saggio del campo aperto, idrolabirinto di Morris, labirinto radiale e saggi di comportamento per testare l'acutezza visiva
Tecniche psicofisiche
- generazione di stimoli visivi, stazionari e dinamici, di complessità arbitraria
- generazione di stimoli cromatici per la ricerca sulla percezione dei colori
- tecniche per l'ottimizzazione della raccolta dati
- generazione di stimoli uditivi o stimoli a modalità crociata (visivi-uditivi)
- tecniche computazionali per la modellizzazione della funzione visiva
Tecniche di visualizzazione delle immagini (in collaborazione con l'ospedale Stella Maris)
- tecniche connesse con la risonanza magnetica funzionale (fMRI)
- rappresentazione di stimoli (movimenti, colori, segnali audio-video) nel condotto interno al magnete
- tecniche di analisi delle immagini, anche a livello di singolo evento.
La sede di (Padova) dell'Istituto di Neuroscienze possiede strumenti e competenze che permettono l'uso di un grande numero di tecniche, tra cui:
Laboratorio di Biomembrane:
Tecniche morfologiche
- microscopia elettronica a trasmissione
- immunoistochimica ed immunocitochimica
- microscopia ottica e confocale, microscopia a due fotoni, videoimaging e processamento delle immagini
Cell biology techniques
- determinazioni strutturali ottenute mediante l'espressione di proteine chimeriche fluorescenti
- analisi fluorimetriche di[Ca2+] in popolazioni cellulari
- determinazioni di [Ca2+] in singola cellula, ed in compartimenti subcellulari, mediante fluorocromi non proteici o proteine chimeriche chemiluminescenti a localizzazione preordinata
- determinazioni di [cAMP] a livello subcellulare mediante tecniche di FRET
- determinazioni di apoptosi
- frazionamento subcellulare
- tecniche di coltura di cellule (primarie e/o immortalizzate) e tessuti
- monostrati epiteliali artificiali per test di trasporto
Tecniche biochimiche
- tecniche elettroforetiche: 1D e 2D SDS-PAGE
- western blotting
- cross-linking e marcatura idrofobica di proteine
- dosaggi enzimatici
- saggi di fosforilazione proteica
- preparazione, purificazione e caratterizzazione di proteine
- saggi di affinità con radioligandi per recettori e canali ionici
- determinazione del trasporto di varie specie molecolari in sistemi cellulari, organellari e/o artificiali
- tecniche bio-energetiche: misura del potenziale di membrana, livelli di ATP, respirazione, etc.
- determinazione delle funzioni mitocondriali "in situ" mediante tecniche ottiche
- determinazione del tasso di produzione di specie radicaliche
- saggi di ossidazione tiolica
- saggi ELISA
- preparazione, purificazione e caratterizzazione di anticorpi monoclonali e policlonali
- immunopurificazione di proteine
- valutazione del metabolismo di organi perfusi
- spettroscopia ad assorbimento differenziale
- determinazione di interazioni proteiche: risonanza plasmica di superficie, saggio del doppio ibrido in lievito, etc.
Tecniche di biologia molecolare
- ibridazioni "in situ"
- trasferimenti di Southern e di Northern
- DNase footprinting
- saggi di protezione dalla RNasi
- PCR, RT-PCR, PCR a visualizzazione differenziale
- analisi di attività di promotori (usando luciferasi o CAT come enzimi reporter)
- tecniche standard di DNA ricombinante
- transfezioni stabili e/o transienti di cellule eucariote
Tecniche elettrofisiologiche
- patch-clamp su cellula intera in colture cellulari o sezioni cerebrali
- patch-clamp di singoli canali ionici su cellule, mitocondri, batteri, proteoliposomi
- bilayers planari
Laboratorio sull'invecchiamento:
- disegno di studi epidemiologici (retrospettivi, prospettici e trials clinici)
- monitoraggio
- analisi statistiche multivariate, tecniche di riduzione di dimensionalità, analisi di associazioni condizionate (Bayesian network);
- definizione di indici di salute (Disalibility Adjusted Life Years, Disability Free Life Expectancy, aspettativa di vita sana, anni vita compensati, etc.);
- utilizzo d'indicatori per la valutazione e la programmazione dei servizi sanitari
Laboratorio di Biologia e Fisiopatologia del Muscolo:
Tecniche morfologiche
- criosezioni di tessuto
- microscopia ottica e confocale
- citochimica ed immunoistochimica
- determinazioni ed analisi morfometriche
- visualizzazione e trattamento di immagini digitali
Tecniche di biologia cellulare
- coltura di cellule e tessuti
- transfezione di cellule e tessuti per elettroporazione
- determinazioni fluorimetriche di [Ca2+] intracellulare
- analisi della trsduzione del segnale
- dosaggi enzimatici in cellule viventi
- valutazione dei parametri fisiologici in singole fibre muscolari
- apoptosi cellulare
Tecniche biochimiche ed immunochimiche
- preparazione, purificazione e caratterizzazione di proteine e membrane
- tecniche elettroforetiche: 1D e 2D SDS-PAGE
- western blots
- dosaggi enzimatici
- dosaggi di fosfatasi e fosfochinasi proteiche
- saggi ELISA
- preparazione, purificazione e caratterizzazione di anticorpi monoclonali e policlonali
- cromatografia liquida ad alte prestazioni di sfingolipidi
Tecniche di Biologia Molecolare
- purificazione di RNA e DNA
- PCR e RT-PCR
- analisi di Southern e di Northern
- ibridazioni "in situ"
- tecniche standard di DNA ricombinante
- analisi di attività di promotori
La sede di Cagliari dell'Istituto di Neuroscienze possiede strumenti e competenze che permettono l'uso di un grande numero di tecniche, tra cui:
A. Tecniche biochimiche in vivo e comportamentali:
- microdialisi cerebrale (analisi di dopamina, acetilcolina, noradrenalina e serotonina)
- tecniche di autosomministrazione di farmaci d'abuso
B. Farmacologia comportamentale:
- analisi comportamentale in seguito a stimoli naturali e farmacologici
- tecnica della conditioned place preference (CPP)
- tecnica della conditioned taste adversion (CTA)
- auto-somministrazione di alcol in ratti geneticamente alcol-preferenti
- auto-somministrazione endovenosa di farmaci d'abuso nel ratto e nel topo
- selezione genetica bidirezionale di ratti in base alla risposta ad un determinato farmaco psicoattivo
- modelli sperimentali d'ansia
- tecniche per lo studio di farmaci ad azione anoressizante
- comportamento di turning, deficit motori e sensomotori
- deficit di coordinazione e apprendimento motorio
- comportamento esplorativo, attività generale, locomozione e stereotipie
- memoria di tipo spaziale (a breve e a lungo termine) ed apprendimento
- memoria di lavoro
- tecniche per lo studio di farmaci ad azione analgesica (hot plate e tail flick)
- intossicazione da etanolo attraverso l'utilizzo di gabbie per l'inalazione dei vapori di etanolo nel ratto e nel topo
C. Tecniche di biologia molecolare:
- Western blotting
- saggi ELISA
- ibridizzazione "in situ"
- estrazione e purificazione di RNA e DNA
- RT-PCR e PCR
- saggio dell'RNA protetto da RNasi (RPA)
- mutazioni sito-specifiche
D. Tecniche morfologiche:
- Analisi morfometrica e morfologica su preparati Golgi-Cox
- tecniche di immunocitochimica ed immunoistochimica (immunofluorescenza e immunoperossidasi)
- microscopia ottica e a fluorescenza
E. Tecniche biochimiche:
- saggi di affinità con radioligandi per recettori e canali ionici (tecniche di binding)
- estrazioni di steroidi e analisi quantitativa degli ormoni steroidei mediante dosaggio radioimmunologico
- cromatografia liquida da alte prestazioni (HPLC)
F. Tecniche elettrofisiologiche:
- Voltage clamp con due elettrodi in oociti di Xenopus laevis
G. Tecniche chirurgiche:
- inserzione cannule per microdialisi cerebrale
- inserzione catetere in giugulare
- inserzione di cannule in diverse aree cerebrali
- surrenectomia e castrazione/ovariectomia