Research project

VITECH 04 - servizio specialistico nell'ambito del programma BIOTECH a supporto del progetto VITECH, Lotto n. 4 (DBA.AD001.469)

Thematic area

Biology, agriculture and food sciences

Project area

Intensificazione sostenibile delle produzioni agroalimentari e forestali (DBA.AD001)

Structure responsible for the research project

Institute for Sustainable Plant Protection (IPSP)

Project manager

IRENE PERRONE
Phone number: 0113977927
Email: irene.perrone@ipsp.cnr.it

Abstract

Con l'avvento delle biotecnologie sostenibili, ed in particolare degli approcci basati su genome editing, la tecnica della rigenerazione di piante da colture di protoplasti ha riguadagnato un forte interesse, poiché solo attraverso questo sistema si ha la possibilità di effettuare la modificazione voluta senza introdurre in pianta DNA estraneo quali sequenze del vettore o geni marker. Questo è un vantaggio fondamentale in pianta arborea in cui le sequenze estranee non possono essere eliminate per incrocio e segregazione come nelle piante erbacee.
La base di partenza per l'erogazione del servizio richiesto sarà la messa in coltura in vitro di espianti fiorali (antere e ovari) di vite. Dal callo embriogenico prodotto verranno estratti protoplasti, trasfettati con i reagenti di editing per effettuare la modifica genica di interesse e messi in coltura fino all'ottenimento di embrioni. Gli embrioni somatici ottenuti verranno testati per la verifica dell'editing e poi coltivati in vitro su terreni opportuni per lo sviluppo delle piante.

Goals

Il servizio richiede la messa a punto di un sistema di rigenerazione da protoplasto di piante editate di vite. Gli obiettivi del lavoro saranno:

a) preparazione di colture di protoplasti a partire da diverse varieta di vite e tipologie di espianti e rigenerazione dopo trasformazione;
b) finetuning di protocolli per l'utilizzo di costrutti CRISPR-Cas9 per la trasformazione stabile (disegno e sintesi degli sgRNA, prove sperimentali con diversi tipi di nucleasi, delivery del complesso ribonucleoproteico mediante diversi metodi)

Start date of activity

14/07/2021

Keywords

vite,trasformazione, cisgenesi, genome editing

Last update: 08/02/2023