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Angela Pennacchio; Biagio Pucci; Francesco Secundo; Francesco La Cara; Mos\u00E8 Rossi; Carlo A. Raia. (2008)
Purification and characterization of a novel recombinant highly enantioselective short-chain NAD(H)-dependent alcohol dehydrogenase from Thermus thermophilus
in Applied and environmental microbiology (Print)
"^^rdf:HTML ; pubblicazioni:autori "Angela Pennacchio; Biagio Pucci; Francesco Secundo; Francesco La Cara; Mos\u00E8 Rossi; Carlo A. Raia."^^xsd:string ; pubblicazioni:paginaInizio "3949"^^xsd:string ; pubblicazioni:paginaFine "3958"^^xsd:string ; pubblicazioni:numeroVolume "74"^^xsd:string . @prefix ns12: . prodotto:ID166975 pubblicazioni:rivista ns12:ID309671 ; skos:note "ISI Web of Science (WOS)"^^xsd:string ; pubblicazioni:affiliazioni "Ist Biochim Prot, CNR, I-80131 Naples, Italy \nIst Chim & Riconoscimento Mol, CNR, I-20131 Milan, Italy"^^xsd:string ; pubblicazioni:titolo "Purification and characterization of a novel recombinant highly enantioselective short-chain NAD(H)-dependent alcohol dehydrogenase from Thermus thermophilus"^^xsd:string ; prodottidellaricerca:abstract "The gene encoding a novel alcohol dehydrogenase (ADH) that belongs to the short-chain dehydrogenases/reductases (SDRs) superfamily has been identified in the extremely thermophilic, halotolerant gram-negative eubacterium Thermus thermophilus HB27. The ttadh gene was heterologously overexpressed in Escherichia coli and the protein (TtADH) was purified to homogeneity and characterized. TtADH is a tetrameric enzyme of identical 26,961 Da subunits composed of 256 amino acids. The enzyme has remarkable thermophilicity and thermal stability, displaying activity up to approximately 73 degrees C, a 30 min half-inactivation temperature of approximately 90 degrees C, and good tolerance towards common organic solvents. TtADH shows a strict requirement for NAD(H) as the coenzyme, preference for reduction of aromatic ketones and alpha-keto esters, and poor activity on aromatic alcohols and aldehydes. The thermophilic enzyme catalyses the following reactions with Prelog specificity: the reduction of acetophenone, 2,2,2-trifluoroacetophenone, alpha-tetralone, alpha-methyl and alpha-ethyl benzoylformate to (S)-(-)-1-phenylethanol (>99% enantiomeric excess, ee), (R)-alpha-(trifluoromethyl)benzyl alcohol (93% ee), (S)-1-tetralol (>99% ee), methyl (R)-(-)-mandelate (92% ee) and ethyl (R)-(-)-mandelate (95% ee), respectively, by way of an efficient in situ NADH-recycling system involving 2-propanol and a second thermophilic ADH. This study further supports the critical role of D37 in discriminating NAD(H) from NADP(H) in members of the SDR superfamily."@en ; prodottidellaricerca:prodottoDi istituto:CDS007 , istituto:CDS021 , modulo:ID2129 , modulo:ID4274 ; pubblicazioni:autoreCNR unitaDiPersonaleEsterno:ID6206 , unitaDiPersonaleInterno:MATRICOLA12549 , unitaDiPersonaleEsterno:ID3597 , unitaDiPersonaleInterno:MATRICOLA18403 , unitaDiPersonaleInterno:MATRICOLA19348 , unitaDiPersonaleEsterno:ID15026 . ns12:ID309671 pubblicazioni:rivistaDi prodotto:ID166975 .